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2022-07-27 431

血浆凝固酶试验原理

病原性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附于细菌表面,生成凝块,因而具有抗吞噬的作用。凝固酶试验对于判定该菌株是否具有致病力,很有帮助。葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。

葡萄球菌所产生的凝固酶有以下两种:

结合凝固酶(即凝聚因子):是一种结合于菌体细胞壁的酶,它直接作用于血浆中纤维蛋白原,使之变成纤维蛋白,而使葡萄球菌凝集成块,玻片法阳性结果是由此酶(凝聚因子)所致。

游离凝固酶:是凝血酶原样物质,不直接作用于血浆纤维蛋白原上,而被血浆中的致活剂(即凝固酶致活因子)激活后,变成耐热的凝血酶样物质,此物质可使血浆中的液态纤维蛋白原变为固态纤维蛋白,从而使血浆凝固。试管法的阳性结果为此酶所致。

血浆凝固酶试验方法

玻片法:

在1张洁净玻片中央加1滴9g/L氯化钠(生理盐水)溶液,用接种环取待检培养物与其混合(设阳性和阴性对照) 制成菌悬液,若经10~20s 内无自凝现象发生,则加入兔新鲜血浆1环,与菌悬液混合,观察结果。5~10s内出现凝集者为阳性。

试管法:

用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释,取0.5 ml于试管再加0.5ml待测菌浓菌悬液(需做阳性对照及阴性对照。),混匀后置37℃水浴中,每30min观察1次结果。若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固,阴性对照管(即浓菌液管)不凝固,为阳性;若阴性,继续观察到24小时,不凝固者为阴性。如有凝块或整管凝集出现为阳性。4h后无上述现象出现,则放置过夜后再观察。

(商品化)冻干血浆法:

每支西林瓶加入0.5mL灭菌生理盐水至完全溶解,然后加入葡萄球菌24h肉汤培养物0.3mL,充分混匀, 盖好西林瓶胶塞,置于36±1℃培养,在6h内定时观察结果。结果观察(如下图所示):倾斜或倒置试管时,呈现凝固块,或凝固块体积大于原体积的一半时,为血浆凝固酶阳性。观察结果时应避免用力振动西林瓶,以免凝块振碎。

血凝固酶实验

血浆凝固酶试验应用:

本试验仅用于致病性葡萄球菌的鉴定。

血浆凝固酶试验注意事项

玻片法:

10 秒内观察结果,如超过10 秒可出现假阳性,因此必须用试管法验证凝聚因子试验。 可选择的玻片凝集试验法还包括检测凝集因子和蛋白A的胶乳凝集试验。但胶乳凝集试验和玻片凝固酶试验的结果并不完全一致。

尽管胶乳凝集试验鉴定路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)的可靠性较差,但鉴定金黄色葡萄球菌的特异性和灵敏性均高于传统的玻片凝固酶试验。有些腐生葡萄球菌和松鼠葡萄球菌及某些微球菌属的菌种可能胶乳凝集试验阳性,但玻片凝固酶试验通常阴性。

a. 试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者,应见到明显的纤维蛋白凝胶块,出现羊毛状或纤维状沉淀物并非真正凝固,应判为阴性。中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间(4H以上)孵育,才可出现阳性。

b. 如果培养时间超过4H,应考虑以下几点:

Ⅰ.延长培养时间后,有些菌株产生的葡萄球菌激酶(溶纤维蛋白酶),可以裂解凝块,产生假阴性结果;

Ⅱ.如果使用的血浆不是无菌的(或部分不是无菌的),假阳性和假阴性结果均有可能发生;

Ⅲ.所用待测菌不纯,延长培养时间后,污染菌可能导致假阳性结果。在这点上,含EDTA的血浆优于柠檬酸盐血浆,因为利用柠檬酸盐的细菌(如一些链球菌)可能通过消耗柠檬酸盐促进凝集发生。

Ⅳ.所用血浆缺乏纤维蛋白原(脱纤维血浆)。

试管法:

须制备浓厚的均匀菌悬液,以便观察结果。

最好用EDTA 抗凝的兔血浆,不主张用人的抗凝血,除非经过试验证实其中不含感染因子、没有凝血能力和没有抑制因子。不同种动物血浆因子不同,凝固状态也不同,兔血浆凝块结实,凝固速度快,优于人血浆。

试验不可在高盐培养基上的取菌落,因为可能出现自凝或假阳性。

若被检菌为陈旧的肉汤培养物(超过18~24H),或生长不良,凝固酶活性低的菌株可能检测不出来。

为防止玻片法检测的假阳性反应,必须严格按《全国临床检验操作规程》进行操作。当怀疑待测菌是金黄色葡萄球菌时,对玻片凝固酶阴性的结果应做试管法凝固酶试验确证。玻片法和试管法凝固酶试验的血浆标准是:必须含有足够浓度的凝固酶反应因子和纤维蛋白原,必须无溶纤维蛋白活性和无抑制剂。

本试验应同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性的葡萄球菌的肉汤培养物作为对照。

商品化冻干血浆试剂需按照厂家提供的产品说明书使用及结果判读。

根据2018年数据统计发现,男孩的出生率明显要比女孩高的多,而且目前的男性人口要比女性人口多出将近3000万,这就造成了很多家有儿子的家庭都感到非常的有压力,甚至有些家庭自二胎政策开放以来,二胎任然还是个儿子,不但父母的压力大,还时常担心儿子以后找对象也困难。为什么现在男宝的出生率会这么高呢?其实主要还是离不开这三点原因。

1、 试管婴儿的普及

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随着时代的发展变化,现在人们的观念也都变得开放,尤其是在生育这方面更注重优生优育的选择。试管婴儿的普及化,让更多家庭接受这一种生育方式,这对不孕不育的家庭来说更是一种幸福的选择。而试管婴儿不仅可以解决不孕不育的困扰,还可以自由的选择孩子性别,比如生男生女,或者是同卵双胞胎还是异卵双胞胎,都是可以通过试管婴儿实现的。所以有些更喜欢男孩的家庭,也会通过这个手段来选择孩子性别。

2、 生活方式的变化

我们现在的生活条件都好了,日常生活中我们也都更注重健康和养生,改掉了很多不良的生活习惯,良好的作息和健康的生活也会改变我们的身体健康状况,有些男性会在备孕阶段戒烟戒酒。

我们都知道孩子的性别是由染色体决定的,女性染色体是xx,男性染色体是xy,不抽烟的男性y染色体数量普遍会高一些,所以提供的y染色体数量也会多一些,所以生男孩的几率也会更大一些。一位科学家也做过相关的实验,实验发现吸烟的男性精子中y染色体数量明显要比不吸烟男性的y染色体数量少很多。

3、 二胎政策影响

有些比较喜欢男孩子的家庭总是想要一个男孩,尤其是二胎政策开放以后,家里第一胎是个女孩的,都会为了二胎生个男孩子努力,在2018新生儿数据统计中发现,45%的新生儿都是男孩子。有些第一胎是女孩的家庭,第二胎一般都会要男孩子,否则还会选择人流后再次备孕。这就是为什么男孩的出生率普遍要比女孩的出生率高了。

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